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?..?~?.?~?..?..?~?.?~?..?..?~?.?~?..?..?~?.?~?..??.?~?..?~?.?..?~?.?~?..?..?~?.?~?..?..?~?.?~?..?关于检验你不知道的那些事儿。大家好我是张鑫，欢迎来到《一起学检验》，让我们敲开神秘的检验之门吧。上一讲我们讲了血涂片的制备，简单回忆一下，血涂片的制备包括载玻片盖玻片的准备、推片技巧的三个合适、染色时需注意的染液比例和染色时间。由于本讲涉及图片较多，所以建议大家对照讲义中的图片收听。今天我要开始讲血涂片的判读部分了。在判读血涂片时是要遵循读片顺序的，不要一上来就开始进行白细胞计数。我们先要对血涂片的质量进行评估，首先用4倍镜或者10倍镜快速扫一遍厚区（见图1），看有无大的血液寄生虫，如心丝虫的微丝蚴，或者有无异常大的细胞。之后再看片尾（见图2），是否有大量血小板聚集。然后再往中间寻找单层细胞区（见图3），粗略地估计一下白细胞数。正常情况下平均每个10倍镜视野下白细胞数为13-51个。如果数量较少要跟血球仪的白细胞总数对比，如果机器数值正常则说明是血涂片质量不过关，要重新制备一张。重新制备片子最好使用新鲜的全血，若果没有的话则尽快使用EDTA血制备血涂片。需要注意的是，EDTA会影响红细胞的形态，因此用EDTA血制备的血涂片只能用于白细胞分类计数。找到合适的单层细胞区后再使用40倍镜进行白细胞分类计数。计数时若白细胞数量很多，则要尽可能多数几个视野，有些时候白细胞多到可能3-4个视野就能数够个白细胞，不要为了计数而计数。计数完后再用油镜观察红白细胞形态及评估血小板数。对于怀疑血液寄生虫的病例还要仔细用油镜看片尾的红、白细胞。图1.血涂片的厚区。瑞氏吉姆萨染色，4X图2.血涂片的片尾。瑞氏吉姆萨染色，4X图3.血涂片的薄区。瑞氏吉姆萨染色，40X会出现异常形态的白细胞主要是中性粒细胞和淋巴细胞。白细胞内容物是指寄生在白细胞内的病原微生物。红细胞的异常形态可就比白细胞要丰富得多了，这是判读血涂片的一个重点。红细胞的内容物是指红细胞包涵体和血液寄生虫。血小板的判读主要就是镜下确认血小板数量，尤其是采血不顺利导致血样凝集时，血球仪的血小板计数通常会假性偏低，这时候就要在血涂片下进行确认。血液寄生虫北方比较少见，在课中我不做重点详细介绍。红细胞的形态有很多，我单独归纳整理成两讲，放到后面给大家呈现。这一讲我主要讲红细胞包涵体和血液寄生虫。通常红细胞的包涵体不会改变红细胞的形态，包涵体包括豪乔氏小体、嗜碱性点彩、铁质沉着、卡波环以及犬瘟包涵体等。除了豪乔氏小体外其余都比较少见，大家了解一下有个印象即可。●第一，豪乔氏小体。豪乔氏小体为有核红细胞的细胞核从红细胞内挤出后的核残余。豪乔氏小体为蓝紫色球形结构，大小不定，部位不定，数量不定但通常为一个（见图4）。正常晚幼红细胞的细胞核会在骨髓内被挤压出去，然后被骨髓内的巨噬细胞吞噬。有些时候挤压不完全就会出现豪乔氏小体。豪乔氏小体进入外周血后会被脾脏的巨噬细胞吞噬，而猫的脾脏清除功能较差，因此正常猫的外周血有时候会看见少量豪乔氏小体。豪乔氏小体提示再生性贫血、脾脏功能不良，接受糖皮质激素和长春新碱治疗的犬也会见到豪乔氏小体。图4.图中黑色箭头所指处为豪乔氏小体。瑞氏吉姆萨染色。图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第79页，图4-76●第二，嗜碱性点彩。嗜碱性点彩的定义是：红细胞表面弥散分布的蓝紫色点状物（见图5）。本质是核糖体和多聚核糖体聚集形成的。嗜碱性点彩外观上可能跟网织红细胞表面的蓝紫色颗粒相似，但嗜碱性点彩是用瑞氏吉姆萨染色见到的，而网织红细胞表面的蓝紫色颗粒要用新亚甲蓝染色才可见。嗜碱性点彩的出现提示铅中*和再生性贫血。图5.黑色箭头所指处为嗜碱性点彩。瑞氏吉姆萨染色。图来自于veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第83页，图4-81●第三，含铁包涵体。含铁包涵体为红细胞内的局灶性、蓝紫色颗粒聚集，一般为点状。含铁包涵体由含铁线粒体或者聚集的铁蛋白组成，既可以被瑞氏吉姆萨染色也可以被普鲁士蓝染色（见图6）。含铁包涵体提示铅和铁中*、铁缺乏/线粒体铁代谢障碍、骨髓肿瘤以及某些化学药物的使用，如氯霉素、羟嗪、恶唑烷酮类抗生素。图6.黑色箭头所指处为含铁包涵体，左图为瑞氏吉姆萨染色，右图为普鲁士蓝染色图来自于veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第83页，图4-81●第四，卡波环。卡波环为紫红色的线状圆环，有时呈“8”字形（见图7）。卡波环很罕见，造血异常时可能会出现。图7.卡波环。May-Grunwald-Giemsa染色图来自于veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第84页，图4-84●第五，犬瘟热包涵体。犬瘟热包涵体大小不一，呈圆形或者椭圆形（见图8），左图为经瑞氏吉姆萨染色呈蓝灰色，右图为经DiffQuick染色呈红色。犬瘟热包涵体通常出现在多染性红细胞内，因此瑞氏吉姆萨染色下的犬瘟热包涵体较难辨认，不如DiffQuick染色明显。犬瘟热包涵体提示犬瘟感染，但是犬瘟热病*的*血症很短暂，所以在外周血中很难看到犬瘟热包涵体。图8.黑色箭头所指处为犬瘟热包涵体，左图为瑞氏吉姆萨染色，右图为DiffQuick染色图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第87页，图4-90以上就是红细胞包涵体的全部内容了。大家在讲义当中可以找到各种红细胞包涵体的图示。接下来要讲的是血液寄生虫。可以感染红细胞的病原微生物有很多种，大致分类两类，原虫属，如巴贝斯虫、泰勒虫、猫胞簇虫；细菌类，如立克次氏体，支原体。这些病原微生物巴贝斯虫比较多见，其他的比较少见，就不过多介绍了，在讲义中放了一些图让大家有个印象，等看到疑似的可以翻翻看笔记。血液原虫除了大小有些差别，在形态上非常相似，通常都要通过PCR确诊。立克次氏体和支原体因为比较小，不好观察形态并且很容易跟染液渣子混淆，所以也需要PCR确诊。▼首先介绍一下巴贝斯虫。巴贝斯虫是以蜱虫为媒介传播的血液寄生虫。除了蜱虫这个传播媒介，咬伤、输血等血液交换也是感染巴贝斯虫的重要途径。一篇文献研究表明，外伤比被蜱虫叮咬更容易感染巴贝斯虫。关于中国东部巴贝斯虫阳性犬病史调查显示，被蜱虫叮咬过的只犬只有22只感染了巴贝斯虫，也就是阳性率为6.55%。而出现外伤的39只犬中，有20只都出现了巴贝斯虫感染，阳性率高达51.28%，调查的总计只犬的巴贝斯虫阳性率为9.23%。所以从阳性率来看，打架、咬伤也是传播巴贝斯虫的重要途径，仅仅进行体外驱虫无法杜绝巴贝斯虫的传播。（图9）。图9图片来自：seroprevalencesurveyofBabesiagibsoniinfectionandtickspeciesindogsinEastChina.JieCao,QiqingYang,JianwweiZhang,YongzhiZhou,HoushuangZhang,HaiyanGong,JinlinZhou.VeterinaryParasitology目前发现超过种巴贝斯虫，根据形态学和基因学把巴贝斯虫分为大巴贝斯虫属和小巴贝斯虫属。大巴贝斯虫属如B.caniscanis，B.canisvogeli和B.canisrossi和小巴贝斯虫属如B.gibsoni都可以感染犬。感染猫的巴贝斯虫都是小巴贝斯虫属如B.felis和B.cati。大巴贝斯虫平均大小为3-7微米，小巴贝斯虫平均大小为1-3微米，而犬红细胞的大小为7微米左右，所以大家可以进行一个比较。大小巴贝斯虫除了体积大小不同外，形态也不同。大巴贝斯虫为单一或者成对的梨形体，瑞氏吉姆萨染色可见无色至浅蓝色的胞浆和红色至紫色的细胞核。小巴贝斯虫为单一或者成对的环状结构，形似一枚戒指.大家可以根据讲义中的图示进行对比（图10-11）。图10.大巴贝斯虫，瑞氏吉姆萨染色图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第85页，图4-85图11.图中黑色箭头所指处为小巴贝斯虫，瑞氏吉姆萨染色▼接下来介绍泰勒虫。泰勒虫属和小巴贝斯虫属非常相似。两者有个很重要的区别在于巴贝斯虫的所有增殖过程都在红细胞内，而泰勒虫要先在淋巴细胞内增殖，成熟变成裂殖子后再进入红细胞内（图12）。泰勒虫被认为致病性较低通常不引起临床症状。图12.泰勒虫，瑞氏吉姆萨染色图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第86页，图4-87猫胞簇虫是猫特有的血液寄生虫。其形态跟B.felis很相似（如图13.）图13.猫胞簇虫，瑞氏吉姆萨染色图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第86页，图4-87嗜血支原体是革兰氏阴性、非抗酸性细菌。它们寄生在红细胞的表面，在瑞氏吉姆萨染色下呈蓝紫色球状、杆状或者链状（如图14）图14.嗜血支原体，瑞氏吉姆萨染色图来自于：veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第89页，图4-94巴尔通体可感染犬猫，是一种人畜共患病。症状通常比较轻微，巴尔通体寄生在红细胞内部，为蓝紫色的杆状结构。图15.巴尔通体，瑞氏吉姆萨染色图来自于veterinaryhematologyadiagnosticguideandcoloratlas，第91页，图4-97这一讲我们主要讲了红细胞包含体和病原微生物，红细胞包涵体都比较少见，豪乔氏小体是个重点，大家一定要认识。红细胞内的病原微生物主要有原虫、支原体和巴尔通体。除了巴贝斯虫其他都比较少见，所以巴贝斯虫也是个重点，一定要对大小巴贝斯虫的形态有印象。好好学知识，天天鹿一课。期待和你在下一期课程的相遇。我在鹿一课的《一起学检验》等你。干货收藏
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